A indústria de gado de corte do estado do Mato Grosso é um contribuinte significativo para a economia agrícola do Brasil. No entanto, enfrenta desafios causados por falhas reprodutivas que resultam em perdas substanciais. Investigar as causas de aborto na pecuária do estado de Mato Grosso é fundamental para caracterizar as doenças, principalmente as infecciosas que resultam em perdas reprodutivas nessa região. O estudo visa caracterizar doenças infecciosas que resultaram em abortos no Estado de Mato Grosso, realizando necropsias de produtos fetais e análise de dados epidemiológicos, histopatológicos, microbiológicos e moleculares. Dois artigos são descritos, um sobre um aborto bovino causado por Bacillus cereus e outro sobre três fetos abortados espontaneamente devido à infecção por Ureaplasma diversum. Nossos resultados podem ajudar os produtores a tomarem medidas adequadas para mitigar os riscos dessas doenças e, consequentemente, aumentar sua produtividade. Portanto, é fundamental continuar estudando e monitorando as causas das falhas reprodutivas em bovinos no estado de Mato Grosso para garantir a sustentabilidade a longo prazo da pecuária de corte.
Dissertações/Teses
Detecção molecular do vírus da doença do bico e das penas dos Psitacídeos e Chlamydia psittaci em aves silvestres de vida livre e em cativeiro no estado de Mato Grosso, brasil
As aves desempenham um papel fundamental na avaliação da qualidade do ambiente e são essenciais para a identificação de áreas que devem ser preservadas. Elas são altamente sensíveis às mudanças ambientais, e sua diversidade de espécies e ocupação de habitats as tornam um dos grupos mais estudados na região neotropical. No entanto, as atividades ilegais envolvendo as aves selvagens representa um grande risco para a transmissão de doenças, já que as aves podem estar expostas a agentes infecciosos e condições inadequadas. A abordagem de One Health é uma estratégia colaborativa e transdisciplinar que reconhece a interconexão entre pessoas, animais, plantas e o ambiente compartilhado. Resgatar essas aves com o objetivo de
reabilitação e reintrodução requer a identificação de agentes infecciosos, tanto por razões de saúde pública quanto para evitar a introdução de patógenos exóticos em populações selvagens. Dentre os patógenos de importância na saúde das aves podemos destacar a doença do bico e das penas de psitacídeos (PBFD), causada pelo Beak and feather disease vírus (BFDV) ou Psittacine Circovirus, é uma doença que afeta principalmente aves da ordem Psitaciforme e pode levar à distrofia das penas e imunossupressão. A PBFD tem uma ampla distribuição geográfica. Além da Chlamydia psittaci (C. psittaci), bactéria causadora da clamidiose em aves domésticas e silvestres, principalmente psitacídeos. Podendo ser encontrada em várias espécies
de aves e é uma doença disseminada, causando perdas econômicas na indústria avícola e representando um risco zoonótico para os humanos. Nesse trabalho foi evidenciada a presença de BFDV e Chlamydia sp. em 67,8% (42/62) e 75,8% (47/62) dos animais, respectivamente, a partir da detecção utilizando a técnica de Reação em cadeia da polimerase em Tucano-toco (Ramphastos toco) Araracanga (Ara macao) e Arara Canindé (Ara ararauna) aves silvestres de vida livre e de cativeiro. O BFDV e a C. psittaci podem ser dispersos por aves infectadas, contribuindo para a disseminação
da doença e a detecção desses patógenos em aves silvestres pode ser desafiadora. A preservação das aves é importante para a manutenção do meio ambiente e a avaliação da qualidade ambiental. Contudo o tráfico de aves selvagens pode representar um risco para a saúde pública devido à transmissão de doenças. A abordagem de One Health é recomendada para lidar tanto com doenças zoonóticas, como a clamidiose, quanto com a BFDV que podem afetar aves neotropicais e ter impactos na conservação de espécies.
Criopreservação de espermatozoides epididimários e vitrificação de tecido gonadal de animais silvestres post mortem.
A mortalidade por atropelamentos traz sérios impactos à vida silvestre, o que pode afetar a dinâmica das populações de muitas espécies e, portanto, aumentar o risco de declínio local ou extinção. O objetivo deste trabalho foi utilizar técnicas de recuperação, avaliação e criopreservação de espermatozoides epididimários, e realizar a vitrificação de tecido testicular obtidos de diferentes espécies de animais silvestres de vida livre que evoluíram a óbito, vítimas de atropelamento em estradas de Mato Grosso. Foram obtidos os testículos de 17 espécimes vítimas de atropelamento de diferentes espécies (Guerlinguetus poiaiae, Cerdocyon thous, Myrmechophaga tridactyla, Cuniculus paca, Alouatta caraya, Potos flavus, Speothos
venaticus, Sapajus apella, Didelfis albiventris, Tapirus terrestris e Mazama gouazoubira), e recuperados espermatozoides epididimários pela técnica de compressão. O sêmen foi avaliado quanto à motilidade, vigor, integridade de membrana, integridade acrossômica, concentração espermática e morfologia espermática, e quando possível refrigerado ou criopreservado. Na avaliação imediata (material a fresco) dos espermatozoides epididimários, observou-se valores de motilidade variando entre 0 e 80%, e vigor variando de nulo (sem vigor aparente) a 4, além de viabilidade variando de 0 a 85%, integridade acrossomal variando de 0% a 88%, e concentração espermática variando de 0,5 a 1375 x 106 espermatozoides/mL; na avaliação morfológica foram observados defeitos de cabeça, peça intermediária e cauda, sendo gota proximal e distal os defeitos mais encontrados. Em um espécime de Myrmechophaga tridactyla, na refrigeração os espermatozoides epididimários ficaram viáveis por até duas horas utilizando-se Triladyl® ou Andromed®. Na criopreservação, realizada em Cuniculus paca, Potos flavus, Sapajus apella, Tapirus terrestris, Mazama gouazoubira e Myrmechophaga
tridactyla, pós-descongelamento observou-se valores de motilidade variando entre 0 e 10%, e vigor variando de nulo a 2, além de viabilidade variando de 2 a 11%, integridade acrossomal variando de 1,5% a 20% utilizando Andromed®; e motilidade variando entre 0 e 40%, e vigor variando de nulo a 3, além de viabilidade variando de 2 a 22%, integridade acrossomal variando de 3% a 18% utilizando Triladyl®. Na vitrificação do tecido testicular em Cuniculus paca, Allouata caraya, Potos flavus, x Speothos venaticus, Sapajus apella, Didelphis albiventris, Tapirus terrestris, e Myrmechophaga tridactyla, observa-se dano tecidual e na organização estutural ao utilizar meio de vitrificação com e sem crioprotetor (associação de Etileno Glicol e Dimetilsulfoxido), porém o epitélio germinativo apresenta aparência mais organizada nestes meios em comparação ao material a fresco. Conclui-se que é possível recuperar os espermatozóides epididimários das espécies Guerlinguetus poaiae, Cerdocyon thous, Myrmecophaga tridactyla, Cuniculus paca, Allouata caraya, Potos flavus, Sapajus apella, Tapirus terrestris, e Mazama gouazoubira realizando a compressão do epidídimo. Nas espécies Cuniculus paca, Myrmecophaga tridactyla, Potos flavus, Sapajus apella, Tapirus terrestris, e Mazama gouazoubira foi possível realizar a criopreservação desse material, onde o diluidor Triladyl® demonstrou resultados superiores quando comparado ao Andromed® nas espécies avaliadas. Houve uma aparente preservação de epitélio germinativo após a vitrificação de tecido testicular nas diferentes espécies, no entanto, são necessários mais estudos para determinar a viabilidade da técnica utilizada.
Fatores de virulência e resistência em isolados de Pseudomonas aeruginosa de animais silvestres
Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria onipresente, muito isolada em infecções nosocomiais que possui uma resistência intrínseca a drogas, por
alterações de permeabilidade da membrana, efluxo ativo de antibióticos, secreção de fatores de virulência além de secreção de enzimas β-lactamases
que podem ser transmitidas através de elementos genéticos móveis como as metalo-beta-lactamase (MBL) IMP, VIM, NDM, SIM, SPM e β-lactamases não
metalogênicas como a KPC. Relatos de P. aeruginosa multirresistentes a drogas (MDR) produtoras de carbapenemases do tipo MBL e carbapenemase KPC-2
em isolados de humanos e animais geram grande preocupação. O objetivo deste trabalho foi detectar os genes de virulência aprA, lasA, lasB, plcH, plcN, toxA e algD, os genes de resistência blaIMP-1, blaSPM-1, blaVIM-2, blaNDM-1 e blaKPC-2 e determinar o grau de resistência a antimicrobianos dos isolados de Pseudomonas aeruginosa de animais silvestres atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Mato Grosso. Nos 27 isolados testados, foram detectados os genes de virulência: aprA (16/27 – 59,3%), lasA (18/27 – 66,7%), lasB (20/27 – 74,1%), plcH (17/27 – 62,9%), plcN (23/27 – 85,2%) e toxA (21/27 – 77,8%) e os genes de resistência: blaVIM-2 (2/27 – 7,4%), blaNDM-1 (5/27 – 18,5%) e blaKPC-2 (11/27 – 40,7%). A taxa de resistência antimicrobiana nas amostras foi: Cefepime (CPM) 85,2%, Amicacina (AMI) 77,8%, Ciprofloxacino (CIP) 70,4%, Meropenem (MER) 51,8%, Piperacilina/Tazobactam (PPT) 44,4% e Imipenem (IMP) 29,6%. Esses dados alertam para o problema de resistência e contribuem para saúde única e traz dados inéditos como a detecção dos genes blaKPC-2 e blaNDM-1 em P. aeruginosa de animais silvestres no Brasil. O gene blaKPC-2 teve maior prevalência, dentre os carbapenêmicos, gerando preocupação, principalmente na fauna silvestre, que possui isolados com multirresistência a drogas, possivelmente por genes adquiridos de forma ambiental.
Protótipo de prótese testicular paciente-específico produzido com ácido polilático e revestido com cianocrilato ou polimetilmetacrilato
No intuito de reduzir as consequências psicológicas e estéticas causadas pela orquiectomia eletiva ou terapêutica, desenvolvemos dois tipos de próteses testiculares, que foram produzidas utilizando a impressora 3D, com filamento de ácido polilático, e revestimos com cianocrilato ou com polimetilmetacrilato (PMMA). Foram experimentados em ratos Wistar, sendo a orquiectomia realizada no testículo esquerdo e as próteses implantadas no interior da túnica vaginal, no grupo 1 implantamos a prótese revestida com cianocrilato e o grupo 2 por PMMA. Os implantes demonstraram características interessantes como baixo custo, reduzido tempo de produção, e facilidade na personalização para o paciente. Dois ratos do grupo 1
apresentaram vaginalite monoculear na região do implante em túnica vaginal e 3 (3/10, 30%) apresentaram dermatite fibrosa. No grupo 2, 5 ratos (50%) apresentaram dermatite fibrosa e nenhum apresentou alteração em túnica vaginal. Realizamos um modelo de regressão logística, os resultados não apresentaram associação significativa entre o tipo de prótese e a presença de inflamação na túnica vaginal (p=0,08) ou dermatite fibrosa (p= 0,22). No entanto, sugerimos novos estudos com o cianocrilato. O PMMA se mostrou uma excelente opção como biomaterial para prótese. A dermatite fibrosa ocorreu devido ao processo de cicatrização dérmica, causado pela incisão cirúrgica.
Efeitos sistêmicos e na superfície ocular de cães submetidos à instilação de cetorolaco de trometamol por 30 dias
Objetivou-se avaliar se a instilação de solução oftálmica de anti-inflamatório não esteroidal a base de cetorolaco de trometamol durante 30 dias consecutivos alteraria os parâmetros clínicos, em hemograma, bioquímica sérica e na urinálise de cães saudáveis. Onze cães de pequeno porte (2,9-10 kg) com idades entre 2 e 10 anos foram recrutados para a pesquisa. Os cães foram tratados a cada 12 h com 40 μL de cetorolaco de trometamol a 0,4% em ambos os olhos, durante 30 dias consecutivos. As coletas de sangue e urina foram realizadas para obtenção de valores basais e aos 15 e 30 dias após o início do tratamento. A creatinina se elevou de forma significativa decorridos 15 (1,21 ± 0,1 mg/ dL) e 30 dias (1,22 ± 0,1 mg/ dL) da avaliação basal (0,94 ± 0,1mg/ dL) (p <0,01). O potássio se elevou significativamente apenas ao 30o dia (4,66 ± 0,15 mEq /L), comparativamente a avaliação do 15o dia (4,32 ± 0,12 mEq /L) e ao basal (4,36 ± 0,15 mEq /L) (p < 0,05). Embora a significância, tanto creatinina quanto potássio permaneceram dentro do intervalo de referência para a espécie. Os demais parâmetros hematológicos, bioquímicos e urinários não se alteraram de forma significativa durante o estudo (p > 0,05), concluindo que a instilação de cetorolaco de trometamol por 30 dias não provocou alterações relevantes nestes parâmetros, em cães saudáveis.
Genotipagem de amostras positivas para Raiva em Mato Grosso e Rondônia, captura e identificação de morcego hematófago em Paranaíta-MT.
A raiva é uma doença fatal que acomete os mamíferos, inclusive os humanos. Apesar de não ter tratamento eficaz após o início dos sintomas, pode ser prevenida com vacinação. O período de incubação é variável, causando meningoencefalite não-supurativa. O agente etiológico é um vírus RNA do gênero Lyssavirus, o qual está distribuído pelo mundo todo, exceto na Antártida. O diagnóstico conclusivo é realizado com amostras do sistema nervoso central coletadas post mortem, sendo a prova diagnóstica padrão é a imunofluorescência direta. De 2005 a 2019, mais de 49 mil casos da doença foram registrados em animais no Brasil, sendo 3.418 registrados em animais de interesse pecuário no Estado Mato Grosso. A falta de informações sobre
a genética, a diversidade e distribuição do vírus da raiva no Mato Grosso foi a motivação para a realização deste estudo. Um total de 117 amostras de tecido cerebral de bovinos, equinos, asininos, muares e ovinos de 29 municípios do estado de Mato Grosso e um município do estado de Rondônia, coletadas entre 2014 a 2021, foram positivas para a doença ao teste de imunofluorescência direta e/ou testes biológicos. O material genético foi extraído e a análise molecular foi realizado usando Transcriptase reversa seguida de Reação em Cadeia da Polimerase para o gene N. Das 117 amostras analisadas, 50 foram amplificadas por Transcriptase reversa seguida de Reação em Cadeia da Polimerase, purificadas e sequenciadas, apresentando 93,13%–100% de identidade com o vírus da raiva. Na análise filogenética, houve a formação de quatro clados, os quais foram geneticamente agrupados em regiões distintas dentro da linhagem Desmodus rotundus. Os resultados da geolocalização dos clados contribuirão para orientar os programas de
monitoramento, controle e vigilância sanitária em MT. Foi capturado, identificado e registrado um exemplar da espécie Diphylla ecaudata que não tinha registro científico no estado de Mato Grosso.
Morfologia do sistema reprodutor masculino de serpentes brasileiras da família boidae: aspectos anatômicos, histológicos e suas relações com a biologia reprodutiva.
Com distribuição mundial, serpentes da família Boidae são encontradas nas Américas, Índia, África Central, sul da Ásia e ilhas do Pacífico Sul. No Brasil, quatro gêneros são encontrados: Eunectes, Corallus, Epicrates e Boa. As serpentes apresentam particularidades anatômicas, biológicas e comportamentais que as diferenciam grandemente de outras espécies animais. Informações básicas acerca da anatomia, fisiologia e biologia reprodutiva dos indivíduos deste grupo são escassas em muitas espécies o que dificulta a reprodução em cativeiro (seja de forma natural ou com o uso de biotecnologias). Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo descrever a morfologia do sistema reprodutor masculino de serpentes brasileiras da família Boidae, correlacionando os aspectos anatômicos e histológicos com a biologia reprodutiva destas espécies. Foram obtidos o sistema
reprodutor e o sistema renal de espécimes de Epicrates cenchria, Corallus hortulanus e Boa constrictor, além do fragmento do músculo retrator magnus do hemipênis de um espécime de Eunectes murinus. Amostras de tecidos foram processadas histologicamente e diferentes colorações empregadas (Azul de
Toluidina, Azul de Alcian, Hematoxila-Eosina e PAS). Em E. cenchria é possível observar sazonalidade na produção espermática, com presença de espermatozoides maduros nos períodos mais chuvosos e quentes do ano, bem como o maior volume testicular nesses períodos. Evidencia-se em Boidae brasileiros hemipênis com musculatura estriada com núcleos que tendem a se localizar centralmente ao feixe de fibra (típico da musculatura cardíaca em mamíferos). O Segmento Sexual Renal em E. cechria apresentam variações quando comparados em indivíduos em período reprodutivo e fora deste, com atividade secretória em ambos os períodos.
Efeito de variáveis intrínsecas e extrínsecas no perfil hematológico e bioquímico de Phrynops geoffroanus ((SCHWEIGGER, 1812) e Chelonoidis carbonarius (SPIX 1824)
Os quelônios constituem um componente importante e abundante de muitos ecossistemas terrestres e aquáticos. Entretanto, eles são considerados um dos
grupos de vertebrados mais ameaçados do mundo. Diante disso, a avaliação médica de Testudines, de vida livre ou de cativeiro, é essencial para compreender seu estado de saúde, sendo uma ferramenta para a conservação das espécies. Como animais ectotérmicos, os sinais clínicos nem sempre são evidentes, sendo a avaliação da condição clínica em quelônios muitas vezes complementada com exames laboratoriais. A interpretação dos resultados de exames hematológicos e bioquímicos nos répteis é um desafio, pois eles são modulados por fatores intrínsecos e extrínsecos. Embora as influências da dieta, do ambiente, da estação e do período reprodutivo, por exemplo, sejam reconhecidas por muitos autores, os intervalos de referência (IR) publicados nem sempre consideram esses fatores e, por conseguinte, os IR relatados são amplos e sua eficácia diagnóstica fica limitada. Além disso, a extrapolação dos valores já estabelecidos para outras espécies pode levar a conclusões equivocadas sobre o estado de saúde de um organismo. Assim,
a partir de amostras de sangue de uma espécie de quelônio de água doce (Phrynops geoffroanus) e de uma terrestre (Chelonoidis carbonarius), objetivou-se estabelecer parâmetros hematológicos e bioquímicos e verificar a influência de variáveis intrínsecas (sexo e peso/tamanho) e extrínsecas (estação e ambiente). As amostras sanguíneas foram obtidas de machos e fêmeas de P. geoffroanus, sendo 38 indivíduos amostrados na análise dos parâmetros hematológicos e 30 nos parâmetros bioquímicos. Para esta espécie, os fatores extrínsecos avaliados foram a estação (seca e chuvosa) e o ambiente (cativeiro e córrego urbano). Quanto aos intrínsecos, nos parâmetros hematológicos foram avaliados o sexo e o comprimento
linear da carapaça (CLC). Já para os parâmetros bioquímicos, os fatores intrínsecos foram o sexo e a massa corporal (MC). As amostras de sangue de 48 C. carbonarius adultos e machos foram obtidas durante a estação chuvosa e foram estabelecidos IR, bem como avaliado o efeito do comprimento linear da carapaça sobre os parâmetros bioquímicos. O sangue foi acondicionado em um tubo contendo heparina de lítio, para os testes hematológicos, e em tubo contendo gel ativador de coágulos, para a análise bioquímica. Extensões sanguíneas foram realizadas sem anticoagulante. As amostras hematológicas foram refrigeradas e processadas em até duas horas após a colheita; e para a análise bioquímica o soro obtido por centrifugação foi mantido sob refrigeração até o processamento, não excedendo 24 horas. Os parâmetros hematológicos incluíram a contagem total dos eritrócitos e leucócitos; determinação do hematócrito; concentração de hemoglobina, contagem diferencial de leucócitos e determinação de sólidos totais. O
volume corpuscular médio, concentração de hemoglobina corpuscular média e a razão heterófilo:linfócito também foram calculados. Os parâmetros bioquímicos analisados foram ácido úrico; albumina; aspartato aminotransferase; cálcio total, creatina quinase; creatinina; fósforo; proteína total, ureia, a relação cálcio:fósforo e o valor da globulina. Os resultados e discussão desses dados estão apresentados nos artigos científicos contidos nos apêndices A, B e C desta tese.
Impacto clínico e parasitológico no tratamento a curto prazo de cães com leishmaniose visceral utilizando miltefosina e alopurinol e identificação do locus de sensibilidade a miltefosina
A eutanásia de cães acometidos pela leishmaniose visceral (LV) é uma das medidas de controle da doença, mas está cada dia menos tolerada pelo laço afetivo que une espécie humana e canina. E diante dos estudos apontando que esta estratégia de controle não tem mostrado eficácia na redução dos casos humanos, o tratamento canino tem sido proposto como alternativa ao sacrifício de cães infectados. Os objetivos desta pesquisa foram tratar cães naturalmente infectados pela Leishmania infantum utilizando a miltefosina e alopurinol de forma isolada e em associação avaliando a eficácia dos protocolos através da redução dos sinais clínicos, da diminuição dos títulos de anticorpos pela imunofluorescência indireta (RIFI) e da redução da carga parasitária na pele pela qPCR em 28 dias de tratamento. Assim como, identificar a presença ou deleção do locus sensível a miltefosina (MSL) nas cepas de L. infantum que infectaram esses cães a partir de amostras biológicas coletadas antes dos tratamentos, correlacionando o MSL com a redução dos sinais clínicos e carga parasitária. Os protocolos com alopurinol isolado (20 mg/Kg/BID) ou associado a miltefosina (2 mg/kg/dia) promoveram de forma significativa a redução da carga de parasitos (p < 0.01 e p < 0.01, respectivamente) na pele. As terapias também promoveram declínio significativo dos sinais clínicos nos três grupos de cães (p < 0,01). Foi observada uma correlação moderada entre a carga parasitária da pele e o escore clínico em todos os três grupos de tratamento (r > 0,5). Já os títulos de anticorpos não diminuíram nesse curto período. O MSL foi identificado em 77,8% das cepas e 22,2% apresentaram deleção. A presença do MSL apresentou correlação com a melhora clínica independente do protocolo terapêutico instituído. No entanto, houve uma correlação forte e positiva em relação à diminuição da carga parasitária nos cães tratados exclusivamente com miltefosina, porém, com diminuição da correlação nos tratamentos com associação da miltefosina com alopurinol e alopurinol
isoladamente. Concluiu-se que o tratamento com alopurinol, em curto prazo, reduziu a quantidade de parasitos na pele dos cães com LV. No entanto, sua eficiência é potencializada quando associada a miltefosina. Também foi possível detectar o MSL a partir de amostras clínicas e que sua deleção está presente em cepas L. infantum circulantes em Cuiabá sugerindo a possibilidade uma resistência natural frente a esta droga. Contudo, a pesquisa sobre o MSL deve ser estimulada, pois há indícios que ele possa se tornar um marcador promissor para prever a eficácia da miltefosina conduzindo estratégicas terapêuticas mais eficientes.
